هدف:

انجام صحیح آزمایش  Cryoglobulin بر اساس روش دستی

دامنه کاربرد:

این دستورالعمل جهت انجام آزمایش  Cryoglobulin در نمونه سرم انسانی توسط روش دستی در بخش ایمونولوژی آزمایشگاه کاربرد دارد .

روش جمع آوری نمونه:

نمونه های سرمی که برای یافتن کرایوگلوبولین جمع آوری می شوند باید با دقت جمع آوری شوند تا از درست بودن عدد بدست آمده مطمئن باشیم. جمع آوری نمونه باید در یک لوله vacutainer باشد که از قبل تا دمای 37 درجه در یک حمام آب گرم شده است زیرا در برخی موارد حتی کرایوگلوبولین ها در دمای اتاق رسوب می کنند (^.c 22 ) خون به داخل لوله از قبل گرم شده کشیده می شود به محض دریافت نمونه باید اجازه داد خون به طور کامل در دمای 37 درجه منعقد شود. این مرحله بدین منظور صورت می گیرد که همه پروتئین های قابل رسوب در سرما را در سرم نگه داریم و نه در لخته خون. نمونه جمع آوری شده در یک سانتریفیوژ 37 درجه قرار می گیرد و سرم جدا شده در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شود. اگر چه تجمع رسوب کرایوگلوبولین ها بعد از 24 ساعت با چشم قابل مشاهده است ولی نمونه ها معمولا به مدت 72 ساعت در سرما نگهداری می شوند تا عدد درستی بدست آید. حجم رسوب کرایوگلوبولین ها در یک لوله شبیه لوله HCT نشان داده می شود و نتایج به صورت درصد حجم سرم بیان می شود. 

نمونه لازم و موارد رد نمونه :

نمونه سرم تازه.
نمونه نباید همولیز ، لیپمیک و یا ایکتریک باشد.
نمونه باید شفاف و فاقد هر گونه Clot و یا رشته های فیبرین باشد.
ذخیره سازی نمونه در دمای 2-8°c به مدت 7 روز
نمونه های ذخیره شده در فریز بعد از دفریز شدن باید توسط ورتکس، همگن شوند.
از فریز کردن نمونه هایی که قبلاً دفریز شده اند به شدت اجتناب شود .
هیچ وقت برای تشخیص کرایوگلوبولین ها قبل از آزمایش ، خون یا سرم را در یخچال نگهداری نکنید.

لوازم مورد نیاز :

سمپلر کالیبر به همراه سر سمپلرهای نو یکبار مصرف
دستکش های یکبار مصرف بدون پودر ترجیحاً از جنس وینیل
لوله هماتوکریت (بدون ضد انعقاد ) وینتروب یا لوله های مدرج سانتریفیوژ
خمیر هماتوکریت
سانتریفیوژ
سرم فیزیولوژی

اساس آزمایش :

پرسیپتیاسیون
سرم بیمار دارای کرایو گلوبولین در درجه حرارت یخپال رسوب می کند . مقدار پروتئین رسوب شده به حجم کل سرم را اندازه گیری نموده و در صورت لزوم نوع و ترکیب کرایوگلبولین را می توان مشخص کرد . 

روش انجام آزمایش :

ابتدا سرم بیمار را در شرایط دمای 37 درجه از لخته جدا می کنیم.
سپس به وسیله سمپلر مقداری از سرم را برداشته و داخل لوله مویینه می ریزیم.
سپس بوسیله خمیر ته آن را می پوشانیم.
سر و ته لوله مویینه را بوسیله پارافیلم پوشانده و داخل یخچال می گذاریم.
از زمان یخچال گذاری به مدت 1 هفته لوله ها را هر روز از لحاظ کدورت بررسی می کنیم.
در صورت مشکوک شدن به کدورت لوله ها را شرایط سرد سانتریفوژ کرده و رسوب آن را بررسی می کنیم. (می توان از سانتریفوژ یخچال دار استفاده کرده یا مقداری یخ خرد شده و آب خیلی سرد داخل لوله آزمایش ریخته و لوله های مویینه را در آن قرار داده و بعد سانتریفوژ کنیم)
در صورت مثبت بودن در زمان 3 تا 5 روز، رسوب شدن کرایو گلبولین ها در لوله مشاهده خواهد شد.